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旭唖娃阿挨姶逢葵茜穐渥粟夷葦芦鯵梓斡宛姐虻飴絢綾鮎或萎袷庵按闇鞍杏伊惟椅畏謂亥郁磯溢碓茨鰯允咽淫胤蔭吋烏迂卯鵜窺丑頴臼嘘唄欝蔚鰻姥厩瓜閏噂云艶荏餌叡嬰曳洩瑛盈穎榎厭堰奄怨掩焔燕伽苑薗鴛於甥旺襖鴬鴎岡荻迦臆桶牡俺嘉珂禾苛茄蝦嘩霞俄峨牙臥蛾駕廻恢橿魁晦芥蟹凱叶咳崖碍蓋鎧骸浬馨蛙柿蛎鈎劃廓撹赫顎笠樫莞梶鰍恰葛鰹巌椛樺鞄兜竃蒲釜鎌噛鴨栢茅萱粥苅瓦侃姦柑桓祇澗潅竿翰黍諌韓舘玩癌翫贋雁伎嬉毅畿稀徽彊亀妓蟻誼掬鞠吃桔橘砧杵仇駒汲灸笈渠鋸禦亨侠僑兇匡卿喬怯蕎饗尭桐粁僅巾錦欣欽禽芹衿倶狗玖矩躯駈鍵喰寓串櫛釧屑窟沓轡窪熊隈粂栗鍬伍卦袈祁圭珪乞慧桂畦稽繋罫荊詣頚弘戟隙桁訣浩倦喧拳捲腔牽硯鹸絃舷諺乎姑狐糊袴股胡菰虎跨鈷裟吾梧檎瑚醐鯉佼倖勾喉垢宏巷庚咋昂晃杭梗糠紘肱膏砿閤鴻劫壕濠轟麹鵠漉甑忽惚狛此頃坤昏梱痕艮些叉嵯沙瑳坐挫哉塞采犀砦冴阪堺榊肴埼碕鷺腫朔柵窄鮭笹匙拶薩皐鯖捌錆鮫晒撒燦珊纂讃餐斬仔屍孜斯獅爾痔而蒔汐鹿樟鴫竺宍雫叱嫉悉鉦蔀篠偲柴屡蕊縞紗杓灼錫惹呪綬洲繍蒐塵逗讐蹴輯酋什戎瑞夙峻竣舜駿楯淳醇曙渚薯藷恕鋤哨嘗妾娼庄廠捷昌梢樵湘菖蒋蕉裳醤狙鍾鞘丞擾杖穣埴拭燭蝕尻晋榛疹秦芯壬腎訊靭笥諏須厨翠錐嵩趨雛椙菅頗雀裾摺凄棲栖醒脆戚弛脊蹟碩蝉尖註撰栴煎煽穿箭羨腺舛詮賎閃膳糎噌岨曾曽楚槻疏蘇遡鼠叢爽宋匝惣掻悌槍漕痩糟綜聡蒼鎗捉袖其揃遜汰詑唾柁舵楕陀騨堆岱戴腿苔黛鯛醍鷹瀧啄托琢鐸茸凧蛸只叩辰巽竪辿狸鱈樽誰鳶奈坦旦歎湛箪綻耽蛋檀智蜘馳筑酎樗瀦猪苧凋喋寵帖暢牒楳柏蝶諜銚捗椎槌鎚栂掴醗佃柘辻蔦綴鍔椿潰壷嬬紬爪吊叛鶴剃釆挺梯汀碇禎諦蹄鄭釘鼎擢鏑溺誹轍填纏甜貼顛桧澱兎堵妬屠杜廟菟賭鍍砥砺塘套宕嶋梼斧淘涛燈祷董蕩藤鐙憧撞瞳萄鴇涜禿栃橡椴苫寅酉瀞噸惇敦沌遁頓呑圃那乍凪薙謎灘捺鍋楢馴畷楠汝迩匂賑虹廿韮濡禰祢葱捻撚乃廼之埜嚢膿覗蚤巴播杷琶罵芭盃牌鱒煤狽這蝿秤矧萩剥箔粕曝莫駁粍函硲箸肇筈櫨幡畠溌筏鳩噺塙蛤隼尤斑氾汎挽磐蕃匪庇斐緋涌樋簸枇毘琵眉柊稗疋髭彦膝菱肘弼畢逼熔沃媛紐謬彪瓢豹錨鋲蒜蛭鰭彬斌瀕埠冨琉芙阜撫葡蕪楓葺蕗淵弗鮒吻扮焚糞蔽頁僻碧瞥蔑箆篇娩鞭鋪甫輔戊菩椀呆峯庖捧朋烹萌蓬蜂鋒鳳鵬貌鉾吠頬卜睦穆釦勃殆幌昧哩槙枕鮪柾桝亦俣沫迄侭麿蔓巳箕蜜湊蓑稔牟鵡椋冥姪牝棉緬麺摸孟蒙儲杢勿餅籾貰悶也冶爺耶弥靖薮鑓愈佑宥揖柚湧猷祐邑輿傭妖楊耀蓉遥慾淀螺莱洛嵐藍蘭李梨璃裡葎掠劉溜龍侶亮凌梁瞭稜諒遼淋燐琳鱗麟瑠伶嶺怜玲苓憐漣煉簾聯蓮呂魯櫓賂婁弄榔牢狼篭聾蝋麓禄肋倭歪脇鷲亙亘鰐詫藁蕨碗腕

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旭亜唖娃阿哀愛挨姶逢葵茜穐悪握渥粟夷葦芦鯵梓圧斡扱宛姐虻飴絢綾鮎或萎袷安庵按暗案闇鞍杏以伊位依偉囲稲委威尉惟意慰易椅為畏異移維緯胃点衣謂違遺医井亥域育郁磯一壱溢逸碓茨芋鰯允印咽員因姻引飲淫胤蔭雲院陰隠韻吋右宇烏羽迂雨卯鵜窺丑頴園臼渦嘘唄欝蔚鰻姥厩浦瓜閏噂云運艶荏餌叡営嬰影映曳栄永泳洩瑛盈穎点英衛詠鋭液疫益駅悦謁越閲榎厭円屋堰奄宴延怨掩援沿演炎焔煙燕猿縁伽苑薗遠鉛鴛塩於汚甥凹央奥往応火押旺横欧殴王翁襖鴬鴎黄岡沖荻億迦介憶臆桶牡乙俺卸恩温穏音下化仮何点価佳加可嘉夏嫁家寡科暇果架歌河外珂禍禾稼箇花苛茄荷華菓蝦課嘩貨垣過霞蚊俄峨我牙画臥芽蛾賀雅餓駕覚会解回塊壊廻快怪悔恢懐戒拐改橿魁晦械海灰界皆絵芥蟹開階貝凱劾叶点咳害崖慨概涯碍蓋街該鎧骸浬馨蛙完柿蛎鈎劃嚇各廓拡撹格核殻獲確穫汗角赫較郭閣隔革学岳楽額顎掛笠樫莞梶鰍潟割喝恰括活渇滑葛褐轄且鰹巌椛樺鞄株兜竃蒲釜鎌噛鴨栢茅萱基粥刈苅瓦乾侃冠寒刊勘勧巻喚堪姦点軌官寛干幹患感慣憾換敢柑桓棺款歓祇漢澗潅環甘監看竿管簡緩缶翰肝艦黍観諌貫還鑑間閑関陥韓館舘丸含岸朽玩癌眼岩翫贋雁頑顔願企伎危喜器巨奇嬉寄岐希幾忌揮机旗既期棋棄点機帰毅気汽畿祈季稀紀徽規記貴起彊鏡輝飢騎鬼亀偽儀妓宜戯技擬欺犠疑勤義蟻誼議掬菊鞠吉吃喫桔橘詰砧杵謹却客脚虐逆丘久仇休及吸宮弓急救駒求汲泣灸球究窮笈級糾給旧牛去居点拒拠挙渠虚許距鋸漁禦魚亨享京薫供侠僑兇競共凶協匡卿叫喬境峡強契経怯恐恭挟教橋況狂狭矯胸脅興蕎郷劇響饗驚仰凝尭暁業局曲極玉桐粁僅倹均巾錦斤欣欽琴禁禽筋緊芹菌衿襟点近金吟銀九倶句区狗玖矩苦躯駆駈鍵具愚虞喰空偶寓遇隅串櫛釧屑屈言掘窟沓靴轡窪熊隈粂栗繰桑鍬勲君湖伍訓群軍郡卦袈祁係傾刑兄啓圭珪型乞形径恵慶慧憩掲携敬景桂渓畦稽系点継繋罫茎荊蛍計詣警軽頚鶏芸迎鯨弘戟撃激隙桁傑欠決潔穴結血訣月件浩倦健兼券剣喧圏堅嫌建憲懸拳捲腔検権牽犬献研硯絹県肩見謙賢軒遣項告険顕験鹸元原厳幻弦減源玄現絃舷点諺限乎個古呼固姑孤己庫弧戸故枯紺狐糊袴股胡菰虎誇跨鈷雇顧鼓五互裟午呉吾娯後御悟梧檎瑚碁語誤護醐歳鯉交佼侯候倖光公功効勾厚口向材后喉坑垢好孔孝宏工巧巷幸広庚康咋点恒慌抗拘控攻昂晃更杭校梗構江洪三港溝甲皇硬稿糠紅紘絞綱耕考肯肱酸膏航荒行衡講貢購郊酵鉱砿鋼閤降姉香高鴻剛劫号合壕拷濠豪轟麹克刻死国穀酷鵠黒獄漉腰甑忽惚骨狛込諮此頃今困坤墾婚恨懇昏昆根梱混痕点式艮魂些佐叉唆嵯左差査沙瑳砂詐鎖疾坐座挫債催再最哉塞妻宰彩才採栽斜済災采犀砕砦祭斎細菜裁載際剤在酌罪財冴坂阪堺榊肴咲崎埼碕鷺作削腫搾昨朔柵窄策索錯桜鮭笹匙冊刷点察拶撮擦札殺薩雑皐鯖捌錆鮫皿晒衆柔傘参山惨撒散桟燦珊産算纂蚕讃賛出餐斬暫残仕仔伺使刺司史嗣四士始準姿子屍市師志思指支孜斯施旨枝止署氏獅祉私糸紙紫肢脂至視詞詩試誌点資賜雌飼歯事似侍児字寺慈持時尚次滋治爾璽痔磁示而耳自蒔辞汐鹿樟笑識鴫竺軸宍雫七叱執失嫉室悉湿漆鉦質実蔀篠偲柴芝屡蕊縞舎写射捨赦情煮社紗者謝車遮蛇邪借勺尺杓灼爵点釈錫若寂弱惹主取守手朱殊狩珠種唇趣酒首儒受呪寿授樹綬需囚収周神宗就州修愁拾洲秀秋終繍習臭舟蒐塵逗襲讐蹴輯週酋酬集醜什住充十従戎瑞汁渋獣縦重銃叔夙宿淑祝縮粛塾熟点術述俊峻春瞬竣舜駿准循旬楯殉淳整潤盾純巡遵醇順処初所暑曙渚庶緒誓書薯藷諸助叙女序徐恕鋤除傷償石勝匠升召哨商唱嘗奨妾娼宵将小少窃扇庄床廠彰承抄招掌捷昇昌昭晶松梢点樵沼消渉湘焼焦照症省硝礁祥称章前粧紹肖菖蒋蕉衝裳訟証詔詳象賞醤狙鍾鐘障鞘上丈丞乗冗剰城場壌嬢常双擾条杖浄状畳穣蒸譲醸錠嘱埴飾操拭植殖燭織職色触食蝕辱尻伸信侵草点娠寝審心慎振新晋森榛浸深申疹真属秦紳臣芯薪親診身辛進針震人仁刃太壬尋甚尽腎訊迅陣靭笥諏須酢図厨対吹垂帥推水炊睡粋翠衰遂酔錐錘随退髄崇嵩数枢趨雛据杉椙菅頗雀裾宅澄摺寸世瀬畝是凄制勢姓征性成政点丹星晴棲栖正清牲生盛精聖声製西誠胆請逝醒青静斉税脆隻席惜戚斥昔析弛積籍績脊責赤跡蹟碩切拙接摂折設逐節説雪絶舌蝉仙先千占宣専尖川戦註撰栓栴泉浅洗染潜煎煽旋穿箭線点繊羨腺舛船薦詮賎践選遷銭銑閃鮮聴沈善漸然全禅繕膳糎噌塑岨措曾曽楚槻疏疎礎祖租粗素組蘇訴阻遡鼠僧創釣叢倉喪壮奏爽宋層匝惣想捜掃挿掻悌早曹巣槍槽漕燥争痩相窓糟総綜聡点荘葬蒼藻装走送遭鎗霜騒像増憎徹臓蔵贈造促側則即息捉束測足速俗点登賊族続卒袖其揃存孫尊損村遜他多凍汰詑唾堕妥惰打柁舵楕陀駄騨体堆盗耐岱帯待怠態戴替泰滞胎腿苔袋貸点逮隊黛鯛代台大第醍題鷹滝瀧卓啄動托択拓沢濯琢託鐸濁諾茸凧蛸只得叩但達辰奪脱巽竪辿棚谷狸鱈樽誰鳶奈単嘆坦担探旦歎淡湛炭短端箪綻耽軟蛋誕鍛団壇弾断暖檀段男談値知地点恥智池痴稚置致蜘遅馳築畜竹筑蓄念秩窒茶嫡着中仲宙忠抽昼柱注虫衷農酎鋳駐樗瀦猪苧著貯丁兆凋喋寵俳帖帳庁弔張彫徴懲挑暢朝潮牒町眺楳柏脹腸蝶調諜超跳銚長頂鳥勅捗直朕点珍賃鎮陳津墜椎槌追鎚痛通塚栂掴醗佃漬柘辻蔦綴鍔椿潰坪壷嬬紬爪吊叛鶴亭低停偵剃貞呈堤定帝底庭廷弟釆抵挺提梯汀碇禎程締艇訂諦蹄逓彼邸鄭釘鼎泥摘擢敵滴的笛適鏑溺哲誹点撤轍迭鉄典填天展店添纏甜貼転顛桧伝殿澱田電兎吐堵塗妬屠徒斗杜渡廟菟賭途都鍍砥砺努度土奴怒倒党冬賓刀唐塔塘套宕島嶋悼投搭東桃梼棟斧淘湯涛灯燈当痘祷等答筒糖統到武董蕩藤討謄豆踏逃透鐙陶頭騰闘働点憤同堂導憧撞洞瞳童胴萄道銅峠鴇匿弊徳涜特督禿篤毒独読栃橡凸突椴届偏苫寅酉瀞噸屯惇敦沌豚遁頓呑曇鈍圃那内乍凪薙謎灘捺鍋楢馴縄畷南楠俸難汝二尼弐迩匂賑肉虹廿日乳入点如尿韮任妊忍認濡禰祢寧葱猫熱年飽棒捻撚燃粘乃廼之埜嚢悩濃納能脳膿撲覗蚤巴把播覇杷波派琶破婆罵芭馬摩廃拝排敗杯盃牌背肺輩配倍培媒梅鱒煤狽買売賠陪這蝿秤矧萩伯剥博拍点泊白箔粕舶薄迫曝漠爆縛莫駁麦粍函箱硲箸肇筈櫨幡肌畑畠八鉢溌発明茂髪伐罰抜筏閥鳩噺塙蛤隼伴判半反尤帆搬斑板氾汎版犯班畔繁般藩販範矢煩頒飯挽晩番盤磐蕃蛮匪卑否妃庇点悲扉批披斐比泌疲皮碑秘緋罷肥被涌費避非飛樋簸備尾微枇毘琵眉美誉鼻柊稗匹疋髭彦膝菱肘弼必畢筆逼熔沃姫媛紐百謬俵彪標氷漂瓢票表評豹乱描病秒苗錨鋲蒜蛭鰭品彬斌浜瀕貧点頻敏瓶不付埠夫婦富冨布府怖扶敷琉普浮父符腐膚芙譜負賦赴阜附侮撫寮舞葡蕪部封楓風葺蕗伏副復幅服緑福腹複覆淵弗払沸仏物鮒分吻噴墳類齢扮焚奮粉糞紛雰文聞丙併兵塀幣平点柄並蔽閉陛米頁僻壁癖碧別瞥蔑箆楼変片篇編辺返遍便勉娩弁鞭保舗鋪論捕歩甫補輔穂募墓慕戊暮母簿菩倣椀包呆報奉宝峰峯崩庖抱捧放方朋法泡烹砲縫胞芳萌蓬蜂褒訪豊邦鋒鳳鵬乏亡傍剖坊妨帽忘忙房暴望某冒紡肪膨謀貌貿鉾防吠頬北僕卜墨朴牧睦穆釦勃没殆堀幌奔本翻凡盆磨魔麻埋妹昧枚毎哩槙幕膜枕鮪柾桝亦俣又抹末沫迄侭繭麿万慢満漫蔓味未魅巳箕岬密蜜湊蓑稔脈妙民眠務夢無牟矛霧鵡椋婿娘冥名命盟迷銘鳴姪牝滅免棉綿緬面麺摸模妄孟毛猛盲網耗蒙儲木黙目杢勿餅戻籾貰問悶紋門匁也冶夜爺耶野弥厄役約薬訳躍靖柳薮鑓愉愈油癒諭輸唯佑優勇友宥幽悠憂揖有柚湧猶猷由祐裕誘遊邑郵雄融夕予余与輿預傭幼妖容庸揚揺擁曜楊様洋溶用窯羊耀葉蓉要謡踊遥陽養慾抑欲浴翌翼淀羅螺裸来莱頼雷洛絡落酪卵嵐欄濫藍蘭覧利吏履李梨理璃痢裏裡里離陸律率立葎掠略劉流溜留硫粒隆竜龍侶慮旅虜了亮僚両凌料梁涼猟療瞭稜糧良諒遼量陵領力倫厘林淋燐琳臨輪隣鱗麟瑠塁涙累令伶例冷励嶺怜玲礼苓鈴隷零霊麗暦歴列劣烈裂廉恋憐漣煉簾練聯蓮連錬呂魯櫓炉賂路露労婁廊弄朗榔浪漏牢狼篭老聾蝋郎六麓禄肋録倭和話歪賄脇惑枠鷲亙亘鰐詫藁蕨湾碗腕

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亜哀愛悪握圧扱安暗案以位依偉囲委威尉意慰易為異移維緯胃衣違遺医井域育一壱逸稲芋印員因姻引飲院陰隠韻右宇羽雨渦浦運雲営影映栄永泳英衛詠鋭液疫益駅悦謁越閲円園宴延援沿演炎煙猿縁遠鉛塩汚凹央奥往応押横欧殴王翁黄沖億屋憶乙卸恩温穏音下化仮何価佳加可夏嫁家寡科暇果架歌河火禍稼箇花荷華菓課貨過蚊我画芽賀雅餓介会解回塊壊快怪悔懐戒拐改械海灰界皆絵開階貝劾外害慨概涯街該垣嚇各拡格核殻獲確穫覚角較郭閣隔革学岳楽額掛潟割喝括活渇滑褐轄且株刈乾冠寒刊勘勧巻喚堪完官寛干幹患感慣憾換敢棺款歓汗漢環甘監看管簡緩缶肝艦観貫還鑑間閑関陥館丸含岸眼岩頑顔願企危喜器基奇寄岐希幾忌揮机旗既期棋棄機帰気汽祈季紀規記貴起軌輝飢騎鬼偽儀宜戯技擬欺犠疑義議菊吉喫詰却客脚虐逆丘久休及吸宮弓急救朽求泣球究窮級糾給旧牛去居巨拒拠挙虚許距漁魚享京供競共凶協叫境峡強恐恭挟教橋況狂狭矯胸脅興郷鏡響驚仰凝暁業局曲極玉勤均斤琴禁筋緊菌襟謹近金吟銀九句区苦駆具愚虞空偶遇隅屈掘靴繰桑勲君薫訓群軍郡係傾刑兄啓型契形径恵慶憩掲携敬景渓系経継茎蛍計警軽鶏芸迎鯨劇撃激傑欠決潔穴結血月件倹健兼券剣圏堅嫌建憲懸検権犬献研絹県肩見謙賢軒遣険顕験元原厳幻弦減源玄現言限個古呼固孤己庫弧戸故枯湖誇雇顧鼓五互午呉娯後御悟碁語誤護交侯候光公功効厚口向后坑好孔孝工巧幸広康恒慌抗拘控攻更校構江洪港溝甲皇硬稿紅絞綱耕考肯航荒行衡講貢購郊酵鉱鋼降項香高剛号合拷豪克刻告国穀酷黒獄腰骨込今困墾婚恨懇昆根混紺魂佐唆左差査砂詐鎖座債催再最妻宰彩才採栽歳済災砕祭斎細菜裁載際剤在材罪財坂咲崎作削搾昨策索錯桜冊刷察撮擦札殺雑皿三傘参山惨散桟産算蚕賛酸暫残仕伺使刺司史嗣四士始姉姿子市師志思指支施旨枝止死氏祉私糸紙紫肢脂至視詞詩試誌諮資賜雌飼歯事似侍児字寺慈持時次滋治璽磁示耳自辞式識軸七執失室湿漆疾質実芝舎写射捨赦斜煮社者謝車遮蛇邪借勺尺爵酌釈若寂弱主取守手朱殊狩珠種趣酒首儒受寿授樹需囚収周宗就州修愁拾秀秋終習臭舟衆襲週酬集醜住充十従柔汁渋獣縦重銃叔宿淑祝縮粛塾熟出術述俊春瞬准循旬殉準潤盾純巡遵順処初所暑庶緒署書諸助叙女序徐除傷償勝匠升召商唱奨宵将小少尚床彰承抄招掌昇昭晶松沼消渉焼焦照症省硝礁祥称章笑粧紹肖衝訟証詔詳象賞鐘障上丈乗冗剰城場壌嬢常情条浄状畳蒸譲醸錠嘱飾植殖織職色触食辱伸信侵唇娠寝審心慎振新森浸深申真神紳臣薪親診身辛進針震人仁刃尋甚尽迅陣酢図吹垂帥推水炊睡粋衰遂酔錘随髄崇数枢据杉澄寸世瀬畝是制勢姓征性成政整星晴正清牲生盛精聖声製西誠誓請逝青静斉税隻席惜斥昔析石積籍績責赤跡切拙接摂折設窃節説雪絶舌仙先千占宣専川戦扇栓泉浅洗染潜旋線繊船薦践選遷銭銑鮮前善漸然全禅繕塑措疎礎祖租粗素組訴阻僧創双倉喪壮奏層想捜掃挿操早曹巣槽燥争相窓総草荘葬藻装走送遭霜騒像増憎臓蔵贈造促側則即息束測足速俗属賊族続卒存孫尊損村他多太堕妥惰打駄体対耐帯待怠態替泰滞胎袋貸退逮隊代台大第題滝卓宅択拓沢濯託濁諾但達奪脱棚谷丹単嘆担探淡炭短端胆誕鍛団壇弾断暖段男談値知地恥池痴稚置致遅築畜竹蓄逐秩窒茶嫡着中仲宙忠抽昼柱注虫衷鋳駐著貯丁兆帳庁弔張彫徴懲挑朝潮町眺聴脹腸調超跳長頂鳥勅直朕沈珍賃鎮陳津墜追痛通塚漬坪釣亭低停偵貞呈堤定帝底庭廷弟抵提程締艇訂逓邸泥摘敵滴的笛適哲徹撤迭鉄典天展店添転点伝殿田電吐塗徒斗渡登途都努度土奴怒倒党冬凍刀唐塔島悼投搭東桃棟盗湯灯当痘等答筒糖統到討謄豆踏逃透陶頭騰闘働動同堂導洞童胴道銅峠匿得徳特督篤毒独読凸突届屯豚曇鈍内縄南軟難二尼弐肉日乳入如尿任妊忍認寧猫熱年念燃粘悩濃納能脳農把覇波派破婆馬俳廃拝排敗杯背肺輩配倍培媒梅買売賠陪伯博拍泊白舶薄迫漠爆縛麦箱肌畑八鉢発髪伐罰抜閥伴判半反帆搬板版犯班畔繁般藩販範煩頒飯晩番盤蛮卑否妃彼悲扉批披比泌疲皮碑秘罷肥被費避非飛備尾微美鼻匹必筆姫百俵標氷漂票表評描病秒苗品浜貧賓頻敏瓶不付夫婦富布府怖扶敷普浮父符腐膚譜負賦赴附侮武舞部封風伏副復幅服福腹複覆払沸仏物分噴墳憤奮粉紛雰文聞丙併兵塀幣平弊柄並閉陛米壁癖別偏変片編辺返遍便勉弁保舗捕歩補穂募墓慕暮母簿倣俸包報奉宝峰崩抱放方法泡砲縫胞芳褒訪豊邦飽乏亡傍剖坊妨帽忘忙房暴望某棒冒紡肪膨謀貿防北僕墨撲朴牧没堀奔本翻凡盆摩磨魔麻埋妹枚毎幕膜又抹末繭万慢満漫味未魅岬密脈妙民眠務夢無矛霧婿娘名命明盟迷銘鳴滅免綿面模茂妄毛猛盲網耗木黙目戻問紋門匁夜野矢厄役約薬訳躍柳愉油癒諭輸唯優勇友幽悠憂有猶由裕誘遊郵雄融夕予余与誉預幼容庸揚揺擁曜様洋溶用窯羊葉要謡踊陽養抑欲浴翌翼羅裸来頼雷絡落酪乱卵欄濫覧利吏履理痢裏里離陸律率立略流留硫粒隆竜慮旅虜了僚両寮料涼猟療糧良量陵領力緑倫厘林臨輪隣塁涙累類令例冷励礼鈴隷零霊麗齢暦歴列劣烈裂廉恋練連錬炉路露労廊朗楼浪漏老郎六録論和話賄惑枠湾腕

2018年9月11日

結局のところ、ホモロジーモデリングは今日のうちに成功した。

ただし、オンラインサービスを使って。

ローカルな環境でのChimeraおよびModellerを用いたホモロジーモデリングは、実のところ単量体のみをターゲットにしている…らしい。ローカル環境でのホモ多量体(今回は二量体だったが)のホモロジーモデリング法は、努力したものの今のところ発見できていない。

そこで相同複合体の検索・モデリングサーバであるHOMCOSを用いて、相同性が80%近いタンパク質分子を鋳型として、標的タンパク質のホモロジーモデリングを行うことができた。もちろん、簡易的であることは理解しているのでHOMCOSヘルプページにあるModellerを用いたより精密なモデリングを行ってからMDシミュレーションに移りたい。

 

ここからは日記。

上記まとめが少し乱雑になったのは、胃が絞られるように痛む日々が続いているせいだ。胃カメラと診察まであと一週間だが胃薬では抑えが効くかどうかという域に既にある。何とかもってくれ、そして胃カメラで原因がわかって治療法が見つかりますように。何とか治ったらきっとこの日記も書き直したり、後日訂正や改編を行おうと思う。

まとめ1

タイトルは後に変えるだろうし、記事の中身も随時改変する。

 

現在の目標

『有償ソフトを用いずにWin10およびMacOSホモロジーモデリングを行う』

『これからホモロジーモデリングを始めようとする今の私と同じレベルの人にもわかりやすいようにまとめる』

『最終的にはMDシミュレーションを行う』

 

 

今日までに理解した・導入したことメモ

ホモロジーモデリングに必要なデータの種類

PDBからDLした鋳型となるPDBファイル、3次元構造を知りたいタンパク質の2次元配列のFASTA形式ファイル(今回は鋳型となる=相同性の高いタンパク質が何かが判明しているためBLASTなどの配列検索の手順を省略することができた)

 

MDシミュレーションやホモロジーモデリングに必要な、無償で使えるソフトたちを導入

─PyMOL、Gromacs、AMBERTools、Modeller、Chimera (ModellerとChimeraはこれから導入)

─PyMOL、GromacsとAMBERToolsはMDシミュに、Modeller、Chimeraはホモロジーモデリングに用いる予定。もしかしたらもっとスマートにやる方法があるかもしれないが、今のところはこれで

 

PyMOLとは

─Open Sourceの分子可視化ツール。平たく言うと物質の立体構造(3次元構造)を表示してくれる。小さな水分子からタンパク質まで。『可視化』なので構造が見えるようになるだけであって、力場に沿って適切に動かしたりするには別のプログラムが必要

 

Gromacsとは

─Open Sourceの、CPUまたはGPU上で動作するMDシミュレーションのパッケージ。タンパク質の挙動や自由エネルギーの統計力学量を求めるなど様々な目的に使える。様々な力場が入っている

 

AMBERToolsとは

─AMBER力場群を用いるときに使うパッケージ?まだよくわかっていない

 

Modellerとは

ホモロジーモデリングを行うことができる精度の高いプログラム。構造既知のタンパク質でMDシミュレーションを行う時にも、ミッシング残基が存在する場合はこのプログラムを用いる

 

Chimeraとは

─PyMOLと同じく分子可視化ツール

─なぜ一本化しないのか?

─①ホモロジーモデリング②MDシミュについて検索していたら「ChimeraとModellerでホモロジーモデリングを行う」ガイド記事と「PyMOL、Gromacs、AMBERToolsでMDシミュレーションを行う」ガイド記事が見つかったため

─きっとどちらの分子可視化ツールでも①②両方行うことができるだろうから、両方使ってみて使用感の良い方に一本化する…かもしれない

 

力場とは?力場の種類について

─GROMACS、GROMOS、OPLS-AA、AMBER、CHARMMなど。ここに挙げたものはGromacsパッケージに含まれているらしいが…?

─有償と無償がある

─力場とは何かはwikiの方が正確かつ精密なので検索してください…